Determinação Quantitativa de Endotoxinas
As endotoxinas são toxinas encontradas em abundância no interior da membrana
externa das bactérias Gram negativas que recebem este nome devido à técnica de
coloração de Gram. Esta técnica se baseia na espessura da camada
de peptídeoglicano na parede celular das bactérias.
Quando a membrana externa das bactérias é destruída ou lisada, as endotoxinas são
liberadas para o meio externo na forma de lipopolissacarídeos (LPS) e complexos de
lipoproteínas.
A determinação de endotoxinas pode ser feita por exemplo em água para saúde
humana utilizada no preparo de medicamentos e injetáveis e até no processo de
hemodiálise.
Na água utilizada para o processo de hemodiálise, a presença de endotoxinas em
grandes concentrações pode acarretar sérios riscos à saúde dos pacientes renais, os
quais já apresentam comprometimento do sistema imunológico.
Um dos métodos para a determinação de endotoxinas em água para hemodiálise é o
método quantitativo LAL Cromogênico, que utiliza um lisado de amebócito
de Limulus, o qual é derivado do caranguejo Limulus polyphemus, ou também
conhecido como Caranguejo-Ferradura do Atlântico.
Este método foi desenvolvido na década de 60, onde descobriu-se que a hemolinfa
do caranguejo sofria um processo de coagulação, que acontecia devido a presença
de bactérias Gram negativas que desencadeavam uma série de reações enzimáticas
em cascata.
O método quantitativo de LAL Cromogênico determina concentrações de
endotoxinas por mL de amostra utilizado, sendo a unidade de medida EU/mL.
Para a execução do método é muito importante o processo de amostragem da água
para hemodiálise, pois não pode haver contaminação proveniente de outros meios.
A amostra é acondicionada em um tubo apirogênico, livre de contaminações.
A análise pode ser executada num prazo de até 24 horas após a coleta ou a amostra
pode ser congelada, aumentando seu prazo de preservação .
Autora:
Laila Cristina Grubert – Coordenadora Técnica do Sala de Clássicos
Referências:
HIRAI. Claudio K. O Teste de Limulus (LAL)|Analytica 92. Revista Analytica. 2018.
